寡核苷酸藥物迭代不止，前處理平臺如何一招應萬變？

更新時間：2026-03-06

點擊次數：26

過去十年，寡核苷酸藥物的結構改性從未停止：從全磷硫化（PS）修飾ASO，到2'-OMe、2'-MOE修飾，再到如今大熱的GalNAc-siRNA、脂質共軛siRNA…每一代新分子的出現，都在考驗同一個問題：

你上一個項目的前處理方法，還能用在這個新分子上嗎？

傳統LLE + SPE(IPC)兩步法的局限

目前許多實驗室采用液液萃取（LLE）+ 離子對反相SPE處理體內寡核苷酸樣品。流程看似成熟，但存在以下深層局限：

LLE溶劑操作挑戰(zhàn)

LLE常用萃取溶劑（MTBE、乙酸乙酯、正己烷、1-氯丁烷乃至苯酚-氯仿體系）毒性強、氣味大，對通風條件和操作規(guī)范要求高，高通量樣品處理時實際操作挑戰(zhàn)不容忽視。

兩步操作，耗時耗力，誤差疊加

LLE界面乳化、轉移損失不可避免，SPE上樣又是一次回收率關卡，兩步誤差疊加，批間CV難以壓低，ICH M10合規(guī)壓力大。

上樣量大，基質干擾難以控制

當體內濃度低（ng/mL甚至pg/mL級），需大體積血漿上樣（≥500 µL）。SPE對目標物的選擇性不足，會造成基質效應過大，抑制目標藥物信號。

選擇性依賴離子對試劑，隨改性漂移

SPE依賴TEA等外加試劑與磷酸骨架形成離子對，這一相互作用對分子結構高度敏感——鏈長、PS比例、GalNAc或脂質共軛改變，保留因子隨之漂移，oligo藥物變了，方法可能需重新優(yōu)化。

OTX：機制不同，邏輯才真正不同

Clarity OTX采用混合模式陰離子交換（Mixed-Mode Anion Exchange）SPE填料，結合專有配方緩沖液體系，從保留機制上與傳統反相SPE根本不同：

陰離子交換模式與寡核苷酸磷酸骨架產生特異性相互作用。磷酸骨架是所有寡核苷酸的共有結構特征，不隨改性類型變化——這是一個穩(wěn)定的選擇性"錨點"，賦予OTX對不同改性分子的廣譜適應性。
混合模式協同作用進一步提升基質凈化能力，通過洗滌條件的靈活調節(jié)，可有效去除鹽類、糖類、大分子蛋白及基因組DNA等內源性干擾，回收率穩(wěn)定達80%以上。
單步SPE，無需前置LLE，流程縮短，誤差來源減少。

更高的選擇性意味著基質更干凈、基線更低、信噪比更優(yōu)，可顯著縮減所需上樣體積——這對珍貴的動物樣品尤其重要。

Oligo藥物的修飾變了，不需要推倒重建方法邏輯，只需在已有框架內微調洗滌條件。

飛諾美技術團隊針對OTX在各種oligo藥物的提取凈化上已積累了豐富的經驗。

多種寡核苷酸同時定量 / 小鼠肝臟

在同一OTX方法框架下，對Fomivirsen（全PS ASO）、Givosiran（已上市GalNAc-siRNA）及一種處于臨床研究階段的siRNA，共5條鏈進行同時提取與定量。

分析物	分子類型	肝臟回收率	RSD
Givosiran 正義鏈	GalNAc-siRNA	118.8%	5.7%
Givosiran 反義鏈	GalNAc-siRNA	105.9%	2.6%
研究siRNA 反義鏈	siRNA（臨床研究階段）	118.6%	4.0%
研究siRNA 正義鏈	siRNA（臨床研究階段）	118.6%	7.0%
Fomivirsen	全PS ASO	89.0%	1.0%

全部分析物回收率89-119%，RSD≤7%。

全PS修飾2'-MOE Gapmer /

CNS組織（腦+脊髓）

Clarity OTX（100 mg/well），Proteinase K預處理后，腦組織標準曲線accuracy 93-110%，CV<11%，LLOQ 1 ng/mL。圖為添加內標后，目標oligo 在三個QC濃度下的總離子流色譜圖，內標重現性和QC回收率均表現良好。

GalNAc-siRNA（Inclisiran）/

小鼠血漿 & 肝臟（高靈敏度方案）

采用Clarity OTX（100 mg/well）對Inclisiran進行小鼠血漿及肝臟樣品提取，以Fomivirsen為內標，血漿LLOQ低至0.2 ng/mL，肝臟LLOQ低至1 ng/mL，較傳統LLE+SPE方法靈敏度提升10-20倍，且不同操作人員間重現性良好，方法穩(wěn)健性突出。（圖為Inclisiran SS和AS鏈在小鼠血漿基質中的線性結果）

同一平臺，血漿到腦組織，ASO到GalNAc-siRNA，單一分析物到多組分同時定量——方法框架不變，參數按需微調。

產品規(guī)格，覆蓋不同需求

產品規(guī)格			適用場景
Clarity OTX 2 mg/well 96孔板			超低LLOQ，微洗脫富集
Clarity OTX 10 mg/well 96孔板			小體積血漿/血清體內PK研究
Clarity OTX 25/50/100 mg/well 96孔板			較大體積上樣，血漿和組織提取
Clarity OTX 100/500 mg管式			方法開發(fā)，小批量樣品

一對一技術支持

我們根據您的寡核苷酸結構（改性類型、鏈長、共軛系統）、目標濃度范圍及生物基質類型，提供針對性的 Starting SOP，涵蓋樣品前處理、SPE條件優(yōu)化、LC-MS參數建議，支持從方法開發(fā)到ICH M10合規(guī)驗證全流程。

寡核苷酸藥物迭代不止，前處理平臺如何一招應萬變？

寡核苷酸藥物迭代不止，前處理平臺如何一招應萬變？