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【色譜分析】色譜小知識丨流動相制備技巧

高效液相色譜儀的分離原理主要取決于流動相和固定相的吸附和解吸附。流動相的正確配置對實驗數(shù)據(jù)和分離效果至關(guān)重要，它會直接影響樣品中組分的保留和轉(zhuǎn)移，從而對樣品的分離產(chǎn)生影響。因此，正確選擇和配置流動相是非常重要的。本期我們就來介紹一些流動相制備方面的技巧，以幫助大家獲得更優(yōu)異的分離效果和更準確的分析結(jié)果。使用簡單的流動相在HPLC分析中選擇簡單的流動相可以使方法更穩(wěn)定且易于轉(zhuǎn)移，同時在使用的過程中減少故障發(fā)生和停機?；谥亓勘戎苽淞鲃酉嘣诹鲃酉嘀苽溥^程中，如果根據(jù)體積比(V/V...

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【飛諾美色譜】色譜小知識丨高效液相色譜系統(tǒng)常用的檢測器

高效液相色譜（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）檢測器作為高效液相色譜儀的重要組成部分之一，它的作用是將流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號，從而實現(xiàn)定性定量。HPLC檢測器有多種類型，如何正確選擇檢測器很重要。由于樣品組分在流通HPLC系統(tǒng)時會發(fā)生變化，因此選擇哪種檢測器主要取決于樣品及其組成成分的性質(zhì)，或者流動相和樣品在通過HPLC系統(tǒng)時其組成發(fā)生變化的整體性質(zhì)。下面咱們就從幾方面來簡單介紹下常用的幾種高效液相色...

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【飛諾美色譜】生物探索 | 不同溫度對單鏈寡核苷酸分析的影響

治療性寡核苷酸的純化及表征是目前制藥行業(yè)的一大熱點。然而，寡核苷酸的表征，特別是通過離子對反相液相色譜（IP-RPLC）進行表征，可能會非常具有挑戰(zhàn)性。治療性寡核苷酸是通過固相合成制造，也就是核苷酸以特定合成步驟進行循環(huán)。因此，我們必須對n-1和n+1等雜質(zhì)進行表征，這其中可能需要大量的方法開發(fā)步驟來進行優(yōu)化。此外，我們可能還需要對其他密切相關(guān)的雜質(zhì)進行表征和定量，例如硫代磷酸酯的氧化。另一個挑戰(zhàn)是在寡核苷酸分析中可能會觀察到的色譜的變化。保留時間、峰形和峰面積回收率可能在一...

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在色譜寶庫里，挖呀挖呀挖——方法開發(fā)中流動相pH的調(diào)節(jié)

【飛諾美色譜】作為微觀世界探索者，色譜工作者有時候像一位運籌帷幄決勝于千里之外的戰(zhàn)略家，有時候又像一位謀士，對微小的“變化”作出嚴謹縝密的判斷。在方法開發(fā)過程中，pH就是分析勝敗的關(guān)鍵因素，選擇正確或優(yōu)化的pH值往往是致勝關(guān)鍵一步。無論反相、HILIC還是離子交換模式，樣品和流動相的pH值對于您的分析獲得理想結(jié)果至關(guān)重要。那么，你知道pH的概念是如何產(chǎn)生的嗎？pHpH的概念是丹麥化學(xué)家S.P.L.索倫森在1909年提出的?；靖拍睿簆H是水溶性物質(zhì)的酸度或堿度的量度。更復(fù)雜的...

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【飛諾美色譜】色譜小知識丨什么是柱外體積？

柱外體積是液相色譜中死體積重要的組成部分，它包括進樣器體積，混合器體積，色譜柱前后連接管路的體積，連接配件等所產(chǎn)生的空間，以及檢測器流通池體積。根據(jù)您使用的系統(tǒng)和應(yīng)用，在HPLC上開發(fā)超高性能方法需要優(yōu)化上述配件以減少柱外體積。測量柱外體積的方法等度法等度方法的系統(tǒng)體積測量相當(dāng)簡單，可以直接在系統(tǒng)上進行，而無需更改流動相。首先，取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱。然后以固定流速啟動HPLC，并在系統(tǒng)中注入少量丙酮或其他有UV吸收組分，并在270nm或220nm處進行...

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